染色體檢測

染色體核型分析是對整個基因組進行分析，包括染色體數(shù)目異常和結構異常，在血液腫瘤的診斷、疾病危險度評估、預后分層、治療方案選擇和治療效果監(jiān)測、靶向治療以及是否需要進行骨髓移植的選擇等方面有重要臨床意義。

● 骨髓/外周血/腦脊液/胸腹水/淋巴組織(G顯帶)染色體核型分析[CA] 

CLL首選標本為外周血，需用兩種不同的方法進行培養(yǎng)和分析，收取兩份費用

● 先天性染色體異常核型分析[CB]

標本必須用外周血；診斷體質(zhì)性染色體改變，或遺傳性/先天性疾病的染色體異常。

● 染色體斷裂試驗[CC]

標本必須用外周血；用于范可尼貧血（先天性再障）的診斷和鑒別診斷。

熒光原位雜交(FISH)項目

FISH是從細胞水平檢測基因的異常，包括基因的丟失、擴增/增加、易位等，或細微的染色體結構異常，染色體數(shù)目異常，以及識別mar染色體（染色體水平無法識別其結構異常的染色體）?？蓹z測間期細胞，不受中期分裂象限制，也可檢測中期分裂象，尤其在檢測與預后密切相關且有眾多伙伴基因的基因方面具有明顯優(yōu)勢。

● 雙色探針[C1]

● 單色探針

● 骨髓涂片/病理石蠟包埋切片F(xiàn)ISH[C1A]

每一張涂片多做兩種不同的FISH探針檢測，按探針數(shù)收費。

● 間期細胞性別染色體FISH(X/Y)[C2A]

常用于供受者性別不同的移植時，移植后供受者細胞比例的動態(tài)監(jiān)測。

● 染色體全長探針（涂抹探針）FISH[C2C]

用于識別mar染色體或隱匿性易位

FISH多探針組合

● AML 4探針組合[C4A]

RUNX1-RUNX1T1；CBFB分離探針；PML-RARA；MLL分離探針

● AML 8探針組合[C4B]

RUNX1-RUNX1T1；CBFB分離探針；MLL分離探針；PML-RARA；GATA2,MECOM；TP53；DEK-NUP214；MLLT3-MLL

● MDS 5探針組合[C5A]

EGR1/D5S23；D7S486/CEP7；CEP8；D20S108；TP53

● MDS 8探針組合[C5B]

EGR1/D5S23；D7S486/CEP7；CEP8；D20S108；MLL；CEPY；GATA2,MECOM；TP53

● B-ALL 4探針組合[C6A]

BCR-ABL1；E2A分離探針；iAMP21；MLL分離探針

● B-ALL 10探針組合[C6B]

BCR-ABL1；CHIC2/D10Z1/D17Z1；E2A分離探針；ETV6-AML1；iAMP21；

IGH分離探針；MLL分離探針；MYC分離探針；NUP214-ABL1；P16/D9Z3

● B-ALL高危及靶向治療相關11探針組合[C6C]

BCR-ABL1；CRLF2；P2RY8；PDGFRB；E2A分離探針；ETV6-AML1；

iAMP21；MLL分離探針；NUP214-ABL1；JAK2分離探針；TP53

● BCR-ABL1樣5探針組合ALL[C7]

BCR-ABL1；IGH@-CRLF2；P2RY8-CRLF2；PDGFRB分離探針；JAK2分離探針

● T-ALL 4探針組合[C8]

NUP214-ABL1；TRA-D/C分離探針；TCF3分離探針；PDGFRB分離探針

● CLL 4探針組合[C9A]

ATM/CEP11；CEP12；D13S319；TP53

● CLL 8 探針組合 [C9B]

ATM/CEP11；CCND1-IGH；CEP12；D13S319；IGH-BCL2；IGH分離探針；MYB；TP53

● 多發(fā)性骨髓瘤(MM)5探針組合[C10]

CCND1-IGH；FGFR3-IGH；IGH-MAF；TP53；1q21擴增

● 淋巴瘤4探針組合[C11A]

IGH-BCL2；CCND1-IGH；IGH 分離探針；MYC 分離探針。組織印片/ 新鮮標本，不包括病理切片。

● DLBCL 4探針組合[C11B]

IGH-BCL2；BCL6分離探針；CCND1-IGH；MYC/CEP8-IGH三色探針。組織印片/新鮮標本，不包括病理切片。

● MCL4探針組合[C11C]

CCND1-IGH；CEP12；D13S319；TP53。組織印片/ 新鮮標本，不包括病理切片

● 神經(jīng)母細胞瘤2探針組合[C12]

MYCN；1p36微缺失

● 嗜酸相關基因3探針組合[C13]

FGFR1；PDGFRA；PDGFRB；

[可另行加做JAK2分離探針（2016版WHO:PCM1-JAK2融合基因也與嗜酸異常相關）]

● 自選4探針

FISH檢測相關基因臨床意義簡介

● RUNX1-RUNX1T1，t(8;21)(q22;q22)

見于約8%成人和12%兒童AML，不伴KIT突變者預后好，伴KIT、FLT3突變者用TKIs有效。

● CBFB分離探針，inv(16)(p13q22)

inv(16)(p13q22)形成CBFB-MYH11融合基因，通常見于伴嗜酸性粒細胞增高的AML，不伴KIT突變者預后好。

●PML-RARA，t(15;17)(q24;q21)

見于98%的AML-M3，是APL的主要診斷指標。

●DEK-NUP214，t(6;9)(p23;q34)

見于約1-2%的AML，通常預后較差。

●MLLT3-MLL，t(9;11)(p22;q23)

見于AML，尤其是在M5中多見，在所有累及MLL的異常中，預后相對較好，在AML中預后中等。

● MLL(KMT2A) 分離探針，t(v;11q23)/del(11q)

MLL基因易位見于各類型白血病，包括AML、ALL、MAL、t-AML等，總發(fā)生率約10%，在嬰兒B-ALL中發(fā)生率達85%，AML中常見于M4和M5，初發(fā)AML占3%、治療相關AML占10%，預后差。

目前已報道的MLL伙伴基因有近百種，PCR方法難以檢測少見的融合類型，而MLL分離探針可檢測各種MLL易位。

●D7S486/CEP7，-7/del(7q31)

-7/del(7q)發(fā)生于約15%的成人MDS，40%的兒童MDS，50%的治療相關

AML/MDS，在MDS中del(7q)預后中等；-7預后差。AML中-7預后差。

● EGR1/D5S23，-5/del(5q31)

常見于MDS、AML，在MDS中發(fā)生率占10-15%。MDS中del(5q)預后好，而在AML中-5/del(5q)預后差。

●CEP8，+8

常見于AML、MDS和CML急變時，AML/MDS中單獨+8時預后中等，CML患者病程中在t(9;22)易位的基礎上出現(xiàn)+8，往往提示疾病進入加速期或急變期，是疾病進展的高危因素。

●D20S108，20q12/del(20q12)

常見于MDS、MPN、AML等，在MDS患者中預后好，MPD中預后不受影響。

●GATA2,MECOM，inv(3)(q21.3q26.2)/t(3;3)(q21.3;q26.2)

主要見于AML、MDS，發(fā)生率約2-5%，預后極差。

●BCR-ABL1，t(9;22)(q34;q11)

見于CML、ALL、AML等，BCR-ABL1易位是CML的特征性異常，伴BCR-ABL1的急性白血病多預后差。伴BCR-ABL1易位者對TKIs治療有效。

●ETV6(TEL)-AML1，t(12;21)(p13;q22)

主要見于兒童B-ALL，發(fā)生率約25%，預后好。細胞遺傳學水平不易檢出此異常，需用FISH或PCR方法檢測。

●E2A分離探針，t(1;19)(q23;p13.3)/ t(17;19)(q22;p13.3)

主要見于B-ALL，t(1;19)是E2A常見的重排，出現(xiàn)在5%的B-ALL和20%的前B-ALL中，易侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，早期強化療能顯著改善療效；t(17;19)在所有ALL中占1%，預后差。

● iAMP21擴增

見于2%的B-ALL，是復發(fā)的高風險指標，常規(guī)治療效果差，早期發(fā)現(xiàn)，大劑量高強度化療能顯著改善療效。FISH是有效的檢測方法。

● CHIC2/D10Z1/D17Z1，+4/+10/+17

檢測B-ALL超二倍體染色體，在高超二倍體B-ALL中，當+4/+10/+17同時出現(xiàn)時，預后特別好。

● IGH分離探針，t(v;14q32)

見于B細胞腫瘤，包括B-ALL和B細胞淋巴瘤。IGH有多個易位伙伴基因，

IGH分離探針可檢測各種IGH易位。

●P16(CDKN2A)-D9Z3，9p21/del(9p21)

約10%兒童ALL可檢出del(9p21)，尤其在T-ALL中發(fā)生率高，伴del(9p21)者中約90%可檢測到P16基因丟失。

● MYC分離探針，t(v;8q24)

可檢測各種MYC基因的易位。BL中85%為t(8;14)(q24;q32)，10%為t(2;8)

(p11;q24)，5%為t(8;22)(q24;q11)；t(8;14)(q24;q32)還可見于DLBCL(5%-22%)、FL、DHL/THL；MYC異常在DLBCL、DHL/THL、FL中預后差。約2%的T-ALL中可見t(8;14)(q24;q11.2),對治療反應差。

● MYC/CEP8-IGH三色探針

檢測t(8;14)(q24;q32)染色體易位及8號染色體數(shù)目異常。

● NUP214-ABL1

主要見于約6%的T-ALL，TKIs治療有效。

●TRA/D 14q11.2

約30%的兒童T-ALL中常常累及T細胞受體基因TCRA\TCRB\TCRG\TCRD的易位，TRA/D探針可檢測包括t(10;14)(q24;q11.2)、t(1;14)(p32;q11.2)t(11;14)

(p15;q11.2)、t(11;14)(p13;q11.2)等涉及14q11位點的各種TCRA/D易位。

● TLX3分離探針5q35

由于t(5;14)(q35;q32)易位而致TLX3表達失調(diào)，見于20%的兒童T-ALL和13%的成人T-ALL，t(5;14)(q35;q32)易位通常是隱匿性的，細胞遺傳學方法難以識別，用FISH方法可有效檢測。預后差。

● ATM/CEP11，CEP11/del(11q22)

ATM位于11q22，缺失常在CLL中出現(xiàn)，ATM缺失提示預后差，同時伴TP53突變時，預后更差。

● CEP12，12號著絲粒/12三體

12號染色體三體在CLL中多見，預后中等或差；在MCL中預后差。

●D13S319，13q14/del(13q14)

13q14缺失見于很多惡性血液腫瘤，包括CLL、MM、MCL、DLBCL等，在CLL中發(fā)生率約55%，預后好，在MM中發(fā)生率約16-40%，預后中等或差。

●CCND1-IGH，t(11;14)(q13;q32)

是MCL的標志性異常；MM中也常見，在MM中預后較好或中等。

●IGH-BCL2，t(14;18)(q32;q21)

見于FL、DLBCL等淋巴系統(tǒng)腫瘤；若同時有IGH-BCL2和MYC基因易位的Double-Hit或Triple-Hit淋巴瘤預后差。

●D6Z1-MYB，6q23/del(6q23)

CLL中約5%患者可見，預后不良。

● BCL6分離探針3q27

涉及BCL6基因(3q27)的易位，見于30%-35%的DLBCL和10-15%的FL淋巴瘤，在DLBCL中預后差。

● CEPX/CEPY，X/Y著絲粒

異性別造血干細胞移植后嵌合狀態(tài)檢測，實時，準確性高。

●TP53，del(17)(p13)

TP53是重要的抑癌基因，幾乎見于各種髓、淋系腫瘤，其丟失或突變在各種血液腫瘤中都是預后差的標志。

● MM常見相關基因的FISH檢測

◇CCND1-IGH，t(11;14)(q13;q32)

是MCL的標志性異常；MM中也常見，在MM中預后較好或中等。

◇ FGFR3-IGH，t(4;14)(p16;q32)

是MM特征性異常，預后差。至少85%的t(4;14)患者同時存在del(13q)。

◇ IGH-MAF，t(14;16)(q32;q23)

見于約5%的MM患者，易位后可導致MAF基因過表達，預后差。

◇1q21擴增/1p32丟失

是MM中常見異常之一，發(fā)生率約30-35%，與疾病的進展密切相關，伴此異常患者生存期短，預后差。硼替佐米等新藥治療不能克服其不良預后。

◇TP53，del(17)(p13)

在MM患者中約占10%。它的缺失導致患者對化療藥物不敏感，預后極差。

● 與嗜酸粒細胞增高相關基因的FISH檢測

◇ FGFR1 8p11

與FGFR1相關疾病中，常表現(xiàn)為淋巴瘤，特別是T-LBL伴嗜酸粒細胞增多，

CEL或AML。已鑒定出于FGFR1形成融合蛋白的伙伴基因有14種。

◇ PDGFRA 4q12

與PDGFRA相關疾病中，常表現(xiàn)為CEL伴有顯著肥大細胞系累及，或AML伴嗜酸粒細胞增多。常由于4q12隱匿性缺失形成FIPIL1-PDGFRA融合基因。

◇ PDGFRB分離探針

可檢測各種PDGFRB基因易位。PDGFRB融合基因見于MPN、MDS、AML、B-ALL、T-ALL等各種類型白血病，也是BCR-ABL1樣ALL中較常見的異常，通常TKIs治療有效。目前已報道的PDGFRB伙伴基因超過20種，常見的是ETV6(TEL)-PDGFRB。約8%Ph-like ALL存在EBF1-PDGFRB

融合基因。

◇PCM1-JAK2t(8;9)(p22;p24.1)

2016版WHO提出將髓系/淋系腫瘤伴t(8;9)(p22;p24.1)/PCM1-JAK2作為一個暫定的新的分類亞型。PCM1-JAK2融合基因陽性患者常呈現(xiàn)慢性髓系腫瘤特點，例如MPN或MDS/MPN，50%-70%有嗜酸性粒細胞增高和/或骨髓纖維化；較少伴發(fā)T-LBL或B-ALL；骨髓形態(tài)紅系增生明顯伴淋巴細胞聚集。JAK抑制劑治療效果欠佳，預后差，早期需考慮異基因造血干細胞移植?？捎肑AK2斷裂分離探針推測PCM1-JAK2融合基因的存在。

● BCR-ABL1樣B-ALL相關基因的FISH檢測

◇ ABL1基因

目前已報道ABL1除BCR外還有至少7個其它伙伴基因，次常見的為TEL-ABL1，而且大多用伊馬替尼等激酶抑制劑(TKIs)治療有效。用BCR-ABL1融合基因探針間接檢測任何涉及ABL1的易位。

◇ CRLF2分離探針

約50%BCR-ABL1樣B-ALL中存在CRLF2易位，常見CRLF2-IGH，CRLF2易位或突變的ALL多伴有JAK1/2或ABL1家族的激酶活化突變，JAK抑制劑治療有效。

◇ P2RY8丟失探針

P2RY8與CRLF2基因均位于Xp22或Yp11上，相距大約300kb，其間的擬常染色質(zhì)區(qū)微缺失致P2RY8基因增強子與CRLF2基因啟動子并置，導致CRLF2基因過表達。JAK抑制劑治療有效。

◇ PDGFRB分離探針

可檢測各種PDGFRB基因易位。PDGFRB融合基因見于MPN、MDS、AML、B-ALL、T-ALL等各種類型白血病，也是BCR-ABL1樣ALL中較常見的異常，通常TKIs治療有效。目前已報道的PDGFRB伙伴基因超過20種，常見的是ETV6(TEL)-PDGFRB。約8%Ph-likeALL存在EBF1-PDGFRB融合基因。

◇ JAK2分離探針

JAK2基因位于9q24，是細胞因子信號通路上的一種酪氨酸激酶，在MPN、BCR-ABL1樣ALL中都可見JAK2的突變和易位，常見的易位伙伴基因有：PCM1、BCR、ETV6、SSBP2和3q21；在BCR-ABL1樣ALL中已報導的易位伙伴基因有ATF7IP、BCR、EBF1、ETV6、PAX5、PPFIBP1、SSBP2、STRN3、TERF2、TPR，采用JAK2分離探針，均可有效檢測JAK2基因是否受累，無需考慮其伙伴基因。是JAK2抑制劑治療靶點。

● 神經(jīng)母細胞瘤相關基因的FISH檢測

◇ MYCN，MYCN擴增

神經(jīng)母細胞瘤特有的遺傳學改變，預后差。

◇ 1p36微缺失

1p36微缺失導致腫瘤抑制基因失活，多見于神經(jīng)母細胞瘤，預后不良。